Različitost bakterijskih infekcija zahtijeva jasnu identifikaciju patogena i definiciju njegove vrste. Da odrede vrstu mikroorganizma, mikrobiolozima pomažu njegova tinktorijalna svojstva - osjetljivost mikroba na bojenje raznim bojama. Ova metoda vam omogućava da istražite morfologiju patogena. Tinktorijalna svojstva bakterija su od velikog značaja za praktična i teorijska istraživanja u oblasti mikrobiologije.
Mikrobna istraživanja
U bakteriologiji postoji mnogo metoda za bojenje mikroorganizama. Svi su zasnovani na tinktorijalnim svojstvima bakterija. Bojenje vam omogućava da odredite njihov oblik, strukturu, veličinu, relativni položaj. Ovo omogućava rešavanje problema sistematizacije tipova mikroorganizama opšte biologije i komparativne mikrobiologije.
Zašto ih farbati
Bakterije su praktičnoprozirni organizmi, a bez upotrebe bojenja, slabo su vidljivi za konvencionalnu mikroskopiju. Za proučavanje objekata možete koristiti posebne vrste mikroskopije (fazni kontrast, tamno polje), ali najlakši način je bojenje, nakon čega bakterije postaju vidljive u konvencionalnom svjetlosnom mikroskopu.
Priprema uzorka
Bez obzira na tehniku bojenja koja se koristi, postoje jedinstvena pravila za pripremu predmeta koji se proučava. Sljedeće faze su obavezne:
- Sterilni instrumenti prave mrlju na stakalcu.
- Uzorak se suši. Ovo se radi na sobnoj temperaturi ili pomoću ormarića za sušenje.
- Slijedi faza fiksacije - mikroorganizmi se pričvršćuju na staklo posebnim spojevima.
- Pravilno bojenje - uzorak se prekriva bojom na određeno vreme, nakon čega se ispere.
- Završno sušenje - uzorak se ponovo suši.
Najčešće boje
Najčešće korištene boje su na bazi anilina s različitim kiselinskim vrijednostima (pH). Većina boja su praškovi koji su razrijeđeni u alkoholu.
Boje u kojima su kationi agensi za bojenje nazivaju se bazičnimi (pH veći od 7). Mogu se koristiti za bojenje mikroorganizama u crvenu (magenta, safranin), ljubičastu (metilviolet, tionin), plavu (metilen plavo), zelenu (malahit zelena), smeđu (hrizoidin) i crnu (indulin) boje.
Boje, u kojima su agensi za bojenje anjoni, nazivaju se kiselim (pH manji od 7). Oni će obojati uzorak u crveno (eozin), žuto (picrin) ili crno (nigrosin).
Postoji grupa neutralnih boja (na primjer, rodamin B), gdje i kationi i anioni djeluju kao bojila.
Kultura mrtva ili živa
Metode bojenja su podijeljene u dvije grupe prema životnom obliku uzorka za testiranje.
- Vitalno (doživotno) bojenje. Ova metoda proučavanja svojstava mikroorganizama koristi se u proučavanju živih tkiva, što omogućava promatranje vitalnih procesa mikroba. Za ovo bojenje koriste se boje niske toksičnosti i velike prodorne moći.
- Post-vitalno bojenje. Ovo je bojenje mrtvih ili ubijenih mikroorganizama. Zahvaljujući tinktorijalnim svojstvima bakterija, mikrobiolozi određuju njihovu strukturu. Upravo ovo bojenje se najčešće koristi.
Gram-pozitivni i Gram-negativni
Upravo ove karakteristike bakterija mogu se naći u uputstvima za razne lijekove. Ova metoda proučavanja tinktorijalnih svojstava bakterija temelji se na upotrebi gentian violet boje i jodnoj fiksaciji. Ovo je tehnika Hansa Kristijana Grama, danskog lekara koji ju je predložio 1884. Kao rezultat ovog bojenja, bakterije se dijele u dvije grupe:
- Gram (+) - plavo(stafilokoki i streptokoki).
- Gram (-) - mrlja od ružičaste do crvene (enterobakterije, salmonela, E. coli).
Različiti rezultati bojenja su zbog različitih tinktorijalnih svojstava bakterijskih zidova. Metoda bojenja po Gramu je i dalje glavna u dijagnostici nekih zaraznih bolesti.
Druge tehnike bojenja
Hajde da okarakterišemo još nekoliko metoda koje se široko koriste u bakteriologiji.
- Ziehl-Nelsonova metoda - utvrđuje otpornost bakterija na kiselinu. Identificira uzročnike tuberkuloze i mikobakterioze.
- Tehnika Romanovsky-Giemsa - boji acidofilne (octene kiseline i mliječne kiseline) bakterije u crveno, a bazofilne (spirohete i protozoe) u plavo.
- Morozovljeva tehnika - mrlje bakterije u braon i čini njihove flagele vidljivim.
Spore se mogu vidjeti
Tsielovo bojenje fučinom omogućava vam da vidite spore bakterija. Imajući ružičastu boju nakon bojenja, jasno su vidljive na pozadini plavih bakterija. Ova metoda je takođe bakteriološki alat i od velike je praktične važnosti.
