Savremena medicina ima specifične dijagnostičke metode koje omogućavaju utvrđivanje etiologije bolesti kod ljudi na osnovu definicije uzročnika, genetski stranih supstanci koje stimulišu imuni odgovor, nukleinskih kiselina, kao i alergijskih i imunoloških promjena koje nastaju zbog njegovih postupaka. Danas se RIA široko koristi u imunologiji i virologiji, odnosno radioimunotesti, čije ciljeve postavljanja, komponente, tijek, čije ćemo računovodstvo razmotriti u ovom članku. Ovaj test je u stanju da detektuje antigene kao rezultat njihove interakcije sa antitelima.
Definicija
RIA je metoda za dijagnostiku biološki aktivnih supstanci u tečnostima, koja se zasniva na reakciji antigena sa antitelima kada se koriste radionuklidima obeležene analogne supstance koje imaju posebne sisteme vezivanja. Nakon njihove interakcijeformira se imuni kompleks koji se odvaja i proučava njegova radioaktivnost. Poznato je da se radioimuno ispitivanje izvodi uz pomoć standardnih kompleta reagensa.
Svaki reagens može odrediti koncentraciju jedne specifične supstance. Biološka tekućina uzeta od osobe se miješa sa reagensom, nakon perioda inkubacije odvajaju se slobodne i vezane radioaktivne supstance, zatim se radi radiometrija i izračunavaju rezultati. Za označavanje supstanci koristi se izotop joda. Označava se i dodaje u određenoj količini.
Prijava
Radioimuna analiza ima široku primenu u medicini i mikrobiologiji. Koristi se za dijagnostiku bolesti srca i krvnih sudova, bolesti endokrinog i drugih tjelesnih sistema. RIA se također često koristi za identifikaciju uzroka neplodnosti, patologije fetalnog razvoja. U onkologiji se ova analiza provodi kako bi se odredili markeri neoplazmi kako bi se mogla pratiti efikasnost liječenja. U imunologiji, RIA se koristi za proučavanje prisustva imunoglobulina, enzima, proteina i tako dalje u krvi. Danas ova analiza omogućava otkrivanje koncentracije različitih hormona do milionitog dijela jednog grama. Stoga se radioimuna analiza krvi široko koristi u kardiologiji, onkologiji, endokrinologiji, ginekologiji i virologiji.
RIA metode
Uobičajeno je razlikovati nekoliko metoda analize, ovisno o prirodireakcije:
- Nekompetitivnu metodu karakterišu takve komponente reakcije kao što su standardni i detektabilni antigeni, rastvor pufera, antitela obeležena izotopom, određena antitela koja se vezuju za sorbent. Antitijelima koja se testiraju dodaje se antigen. Nakon inkubacije pojavljuju se kompleksi antigen-antitijelo, sorbent se ispere, dodaju se obilježena antitijela koja se vezuju za antigen u kompleksu. Radioaktivnost zavisi od koncentracije antigena koji se testira.
- Kompetitivni radioimuni test je vođen konkurencijom antigena. Ovdje se nalaze komponente reakcije kao što su kontrolni i određeni antigeni, puferska otopina, određena antitijela koja se vezuju za sorbent, kao i antigen obilježen izotopom. Dijagnoza počinje uvođenjem antigena koji se ispituje. Na sorbentu se formira kompleks antigen-antitijelo. Zatim se sorbent ispere i ubrizgava obilježeni antigen. Pri tome se vezuje za antitelo. Uz pomoć brojača mjere se reakcija i količina radioaktivnosti. To će biti obrnuto proporcionalno količini antigena u uzorku.
- Indirektna metoda je najčešća. U ovom slučaju radioimunotest reakcione komponente ima kao što su kontrolni i test serum, antigene ili antitela koja su vezana na sorbentu, antitela obeležena izotopima, puferske rastvore. Antitijela ili antigeni koji su dijagnosticirani reagiraju s antigenima ili antitijelima koja su vezana za sorbent. Zatim se inkubat uklanja, ubrizgavaju se obilježena antitijela koja se vezuju zakompleksi antigen-antitijelo.
Metodologija analize
Dakle, radioimunotest se provodi upotrebom posebnih reagensa. Skupovi su standardni, tako da bilo kakve greške ili prekršaji nisu dozvoljeni. Dijagnostički rezultati su pouzdani. Analiza se radi ujutro, za to od osobe uzimaju vensku krv. U laboratoriji se serum odvaja od krvi koja će se koristiti za RIA. Ovaj serum se miješa sa reagensima. Dobivena smjesa se inkubira na datoj temperaturi u termostatu.
Slobodni i vezani izotopi se odvajaju u rezultirajućoj smjesi. Nakon toga, primljeni materijal se ispituje, a rezultati se izračunavaju. Mehanizam radioimunog testa ima nekoliko opcija. Gore opisana tehnika je RIA tečne faze, budući da su sve komponente u tečnom stanju. Postoji RIA i čvrsta faza, gde se antitela stavljaju u nosač koji se ne rastvara u tečnosti.
Dostupnost dijagnostike
Primjena ove dijagnostičke metode u medicini iz godine u godinu postaje sve popularnija. Radioimunotest je u posljednje vrijeme postao standardna dijagnostička metoda koju može propisati ljekar prilikom postavljanja konačne dijagnoze. Dugo vremena ova vrsta analize se provodila samo u laboratorijama, danas je postala uobičajena metoda istraživanja. Ali RIA zahtijeva korištenje skupe opreme (gama brojači), a kompleti reagensa imaju kratak vijek trajanja. Sve je to glavni nedostatak takve analize, koji je određujeskupa cijena.
Pored toga, RIA je nedavno počela da zamjenjuje modernije istraživačke metode koje ne zahtijevaju interakciju s izotopima. To uključuje enzimski imunotest. Stoga je RIA poželjna u mnogim klinikama. Dugo se koristi u velikim gradovima i dijagnostičkim centrima, ali u običnim bolnicama u malim gradovima ova analiza se praktično ne koristi zbog visoke cijene.
Dostojanstvo RIA
Radioimunotest ima mnoge prednosti. Prilično je specifičan i ima visoku osjetljivost, što omogućava određivanje prisutnosti biološki aktivnih tvari u nevjerovatno malim količinama. Ova analiza se provodi vrlo jednostavno, od osobe je potrebno samo donirati vensku krv. Rezultati testa su 100% tačni i spremni već sljedeći dan. RIA se takođe može lako automatizovati. Dakle, ova analiza vam omogućava da identifikujete proteine koji su otpadni produkti infektivnih bakterija, što ukazuje na prisustvo infekcije u organizmu.
Dijagnoza u virusologiji
RIA koja najviše obećava je za virologiju, jer vam omogućava da brzo identifikujete virusne patogene. To je zbog činjenice da posljednjih godina raste učestalost raznih infekcija, koje se šire velikom brzinom, uzrokujući smrtnost među ljudima. Ovo posebno važi za zemlje koje nemaju visoku vrednostdruštvenog i ekonomskog razvoja (zemlje Dalekog istoka), radioimunotest je ovdje jednostavno neophodan. Mikrobiologija također koristi ovu dijagnostičku metodu za otkrivanje zaraznih bolesti uzrokovanih patogenim bakterijama. Na primjer, RIA se široko koristi za otkrivanje tifusne groznice. U prvim danima bolesti, prije imenovanja liječenja, potrebno je provesti studiju izmeta i povraćanja. Međutim, dijagnostički rezultati će se dobiti nakon dužeg vremena. Ovdje RIA dolazi u pomoć, analiza vam omogućava da u kratkom vremenu identificirate uzročnika bolesti. Osoba daruje krv, sutradan su rezultati studije spremni. Ova analiza pomaže u postavljanju tačne dijagnoze.
Rezultati
Radioimunotest je trenutno jedna od najosjetljivijih dijagnostičkih metoda. Koristi se za analizu bilo koje supstance protiv koje se mogu dobiti antitijela. Ova metoda omogućava da se napravi veliki broj uzoraka u najmanjoj zapremini ispitivane tečnosti, kao i da se snime rezultati u najkraćem mogućem roku, jer se može potpuno automatizovati. Ovu analizu je 1950-ih razvio Solomon Burson. Trideset godina kasnije, postao je široko rasprostranjen. Do danas ne postoji stopostotna alternativa RIA, jer analiza ima visoku osjetljivost. RIA se koristi u raznim granama medicine, kao iu mikrobiologiji i virologiji.
Konačno
Primjena metode u virologiji danas je vrlo relevantna, jer dajesposobnost da se ispita širenje infekcija, postavi tačna dijagnoza i prepiše specifičan tretman. Ovaj problem je posebno aktuelan za zemlje koje imaju nizak stepen privrede i društvenog razvoja. Takođe, ova analiza vam omogućava da otkrijete količinu hormona i enzima u ljudskom tijelu. Da bi dobio pouzdane rezultate, istraživač treba samo da da krv za analizu. Medicina ne miruje, zajedno sa radioimunotestom, pojavljuju se nove metode istraživanja, ali RIA je i dalje jedan od vodećih u medicinskoj dijagnostici.
